一、潔凈室（區(qū)）的概念

美國航空業(yè)的陀螺儀制造過程中最先提出了生產(chǎn)環(huán)境的潔凈要求，為消除空氣中的塵埃粒子對(duì)航空儀器的齒輪、軸承的污染。降低返工率，提高使用壽命。

1.潔凈區(qū)定義：

2.潔凈區(qū)的分類：

按照氣流流型，可分為單向流潔凈室和非單向流潔凈室。

單向流潔凈室

非單向流潔凈室

3.適用的產(chǎn)品：

1.適用于通過最終滅菌方法、通過無菌加工技術(shù)使產(chǎn)品無任何存活微生物的醫(yī)療器械及體外診斷試劑產(chǎn)品的生產(chǎn)，如血管內(nèi)支架、骨科植入物等。

2.適用于需要控制初始污染菌的醫(yī)療器械品種，如透析液（粉）等。

3.與產(chǎn)品直接接觸的單包裝。

4.構(gòu)成：

生產(chǎn)用房：與生產(chǎn)產(chǎn)品工藝流程相對(duì)應(yīng)的功能間，如注塑間、干燥間等。

檢驗(yàn)用房：與檢驗(yàn)有關(guān)的功能間，如陽性對(duì)照間、無菌檢驗(yàn)間、微生物限度間等。

輔助功能用房：為生產(chǎn)服務(wù)的輔助功能間，如洗衣間、潔具間、鏈接各功能間的緩沖過濾通道。

二、潔凈室（區(qū)）檢測標(biāo)準(zhǔn)

引用英制單位（100級(jí)、10 000級(jí)、100 000級(jí)、300 000級(jí)）的標(biāo)準(zhǔn)有：

GB 50457-2008《醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范》

GB/T 16292-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子的測試方法》

GB/T 16293-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))浮游菌的測試方法》

GB/T 16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測試方法》

YY 0033-2000《無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)管理規(guī)范》等

引用ISO單位（1~9級(jí)）的標(biāo)準(zhǔn)有：

GB 50073-2013《潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范》

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》等

無菌醫(yī)療器具潔凈室（區(qū)）環(huán)境要求及監(jiān)測一般參照下表進(jìn)行

檢測方向：

三、潔凈室（區(qū)）的驗(yàn)證

1.溫度

潔凈區(qū)空調(diào)系統(tǒng)不僅有多層凈化空氣的作用，還具有調(diào)節(jié)系統(tǒng)溫度的能力。微生物在溫度、濕度等條件適宜的情況下會(huì)不斷地生長和繁殖。

要求：無特殊要求時(shí)（18~28）℃。

方法標(biāo)準(zhǔn)：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》

檢測點(diǎn)為房間中心一點(diǎn)，應(yīng)在溫度讀數(shù)穩(wěn)定后再記錄。

2.濕度

保持潔凈區(qū)空氣適宜的濕度不僅能夠保證工作人員的 舒適度，更能控制微生物的存活率，保證產(chǎn)品質(zhì)量。

要求：（45～65）%

注意：

某些生產(chǎn)車間會(huì)根據(jù)產(chǎn)品特殊的生產(chǎn)工藝，對(duì)濕度有特殊的要求。例如某些IVD的一些特殊生產(chǎn)工藝環(huán)節(jié)要求空氣濕度盡量干燥，達(dá)到30%以下。

方法標(biāo)準(zhǔn)：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》

測量儀器的選擇：

溫濕度測量儀。其中濕度測量的量程（1～100）%， 分辨率0.1%，測量不確定度±2.5%。

3.氣流組織形式與換氣次數(shù)#p#分頁標(biāo)題#e#

氣流組織：是指對(duì)氣流流向和均勻度按一定要求進(jìn)行組織的空氣流動(dòng)狀態(tài)與分布。

單向流（百級(jí)）：沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風(fēng)速均勻的氣流。

非單向流（亂流）：其原理是靠潔凈送風(fēng)氣流擴(kuò)散、混合、不斷稀釋室內(nèi)空氣，把室內(nèi)污染逐漸排出，達(dá)到平衡。

潔凈室內(nèi)各項(xiàng)指標(biāo)的維持和調(diào)節(jié)都是通過換氣來完成的，換氣性能與其他所有項(xiàng)目都聯(lián)系緊密。合理的換氣次數(shù)、風(fēng)速、氣流組織形式是保證潔凈室性能的前提條件。

方法標(biāo)準(zhǔn)：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》

對(duì)于單向流潔凈室，可采用截面平均風(fēng)速和截面積乘積的方法確定送 風(fēng)量。

垂直單向流潔凈室的測定截面取距地面0.8m的無阻隔面（孔板、格柵除外）的水平截面，如有阻隔面，該測定截面應(yīng)抬高至阻隔面之 上0.25m；

水平單向流潔凈室取距送風(fēng)面0.5m的垂直于地面的截面；

截面上測點(diǎn)間距應(yīng)不大于1m，一般取0.3m，測點(diǎn)數(shù)應(yīng)不少于20個(gè)，均勻布置。

換氣次數(shù)的計(jì)算方法：換氣次數(shù)（次/h）= 風(fēng)速（m/s）x 送風(fēng)口面積（㎡）x 3600/ 房間體積（m）。

對(duì)于非單向流潔凈室，可采取風(fēng)量罩法測量送風(fēng)量并計(jì)算換氣次數(shù)。

換氣次數(shù)（次/h）= 房間送風(fēng)量（m/h） / 房間體積（m）

4.靜壓差

保持合理的靜壓差是保證潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境抵抗外界污染、防止內(nèi)部污染和交叉污染的重要措施。穩(wěn)定的壓差是保證潔凈室潔凈度等級(jí)的重要條件。

要求：

不同級(jí)別潔凈室及潔凈室與非潔凈室之間≥5Pa；潔凈室與室外大氣≥10Pa。

方法標(biāo)準(zhǔn)：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》

5.潔凈度

影響潔凈度的因素眾多，可以分為內(nèi)在因素和外在因素。內(nèi)在因素包括 換氣次數(shù)、壓差、高效過濾器檢漏、潔凈區(qū)的密封性。外在因素包括人員、物品進(jìn)出環(huán)境帶來的塵埃粒子影響和潔凈區(qū)日常清潔頻率。

方法標(biāo)準(zhǔn)：

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》

測量儀器：

粒子計(jì)數(shù)器

采樣量：2.83L/min或28.3L/min。

粒徑：0.3μm、0.5μm、1.0μm、3.0μm、5.0μm、10.0μm。

測試要點(diǎn)：

1. 必須按照測試儀器的檢定周期，定期對(duì)測試儀器作檢定。應(yīng)使用檢定合格，且在使用有效期內(nèi)的儀器。

2. 測試儀器在未進(jìn)入被測區(qū)域時(shí)，若必需，則先清潔表面，或在相應(yīng)的潔 凈室內(nèi)準(zhǔn)備和存放（用保護(hù)罩或其它適當(dāng)?shù)赝庹直Ｗo(hù)儀器）。

3. 在100級(jí)潔凈室內(nèi)用紙時(shí)，上面應(yīng)蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100 級(jí)潔凈室內(nèi)不能用鉛筆和橡皮。

4. 使用測試儀器時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說明書操作。

4.1 儀器開機(jī)，預(yù)熱至穩(wěn)定后，方可按測試儀器說明書的規(guī)定對(duì)儀器進(jìn)行校正，同時(shí)檢查采樣流量和等動(dòng)力采樣頭。#p#分頁標(biāo)題#e#

4.2 采樣管口置于采樣點(diǎn)采樣時(shí)，在計(jì)數(shù)趨于穩(wěn)定后，開始連續(xù)讀數(shù)。

4.3 采樣管必須干凈，嚴(yán)禁滲漏。

4.4 采樣管的長度應(yīng)根據(jù)儀器的允許長度。除另有規(guī)定外，長度不得大于1.5m。

4.5 粒子計(jì)數(shù)器采樣口和儀器工作位置宜處在同一氣壓和溫度下，以免產(chǎn)生測量偏差。

最少采樣點(diǎn)數(shù)目：

懸浮粒子測試最少采樣點(diǎn)數(shù)目可在以下兩種方法中任選一種：

① NL= √A

式中：NL — 最少采樣點(diǎn)；

√A — 潔凈室或潔凈區(qū)的面積，單位為平方米（m2）。

注：在單向流情況下，面積A可以認(rèn)為是垂直于氣流方向上的橫截面積。

② 最少采樣點(diǎn)數(shù)目可從下表查到。

采樣點(diǎn)分布：

潔凈室采樣點(diǎn)的分布應(yīng)均勻，避免在局部區(qū)域過于稀疏。在動(dòng)態(tài)測試時(shí)，懸浮粒子采樣點(diǎn)的分布應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)域設(shè)置。

下列多點(diǎn)采樣的采樣點(diǎn)布置圖示可作參考：

采樣點(diǎn)的位置應(yīng)滿足一下要求：

1.采樣點(diǎn)一般在離地0.8m高度的水平面上均勻布置。

2.采樣點(diǎn)多于5個(gè)時(shí)，也可以在離地面0.8~1.5m高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，但每層不少于5點(diǎn)。

采樣次數(shù)的限定：

對(duì)于任何潔凈室或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點(diǎn)的數(shù)目不得少于2個(gè)，總采樣次數(shù)不得少于5次。每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以多于1次，且不同采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以不同。

最小采樣量：

采樣注意事項(xiàng)：

① 對(duì)于單向流潔凈室（區(qū)），粒子計(jì)數(shù)器的采樣管口應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流潔凈室（區(qū)），粒子計(jì)數(shù) 器的采樣管口宜向上。

② 布置采樣點(diǎn)時(shí)，應(yīng)盡量避開回風(fēng)口。

③ 采樣時(shí)，測試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少活動(dòng)。

④ 采樣完畢后，宜對(duì)粒子計(jì)數(shù)器進(jìn)行自凈。

⑤ 應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染。

結(jié)果計(jì)算：

懸浮粒子濃度的報(bào)出結(jié)果必須按照GB/T 16292-1996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測試方法》中的要求進(jìn)行計(jì)算。報(bào)出值應(yīng)為95%置信上限。

結(jié)果評(píng)定：

判斷懸浮粒子潔凈度級(jí)別應(yīng)依據(jù)下述的兩個(gè)條件：

1.每個(gè)采樣點(diǎn)的平均粒子濃度必須不大于規(guī)定的級(jí)別界限。

2.全部采樣點(diǎn)的粒子濃度平均值的95%置信上限必須不大于規(guī)定的級(jí)別界限。

6.沉降菌

通過自然沉降收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適 宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)基上的菌落數(shù)來 判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來判斷潔凈室（區(qū)）的微生物濃度。

方法標(biāo)準(zhǔn)：

GB/T 16294-1996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法》

培養(yǎng)皿：

一般采用90mm×15mm規(guī)格的培養(yǎng)皿培養(yǎng)基：NA、TSA、SDA、其他經(jīng)驗(yàn)證的培養(yǎng)基生化培養(yǎng)箱：控溫范圍：(0～60)℃并定期對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行溫度的校準(zhǔn)。#p#分頁標(biāo)題#e#

最少采樣點(diǎn)數(shù)目：

沉降菌測試最少采樣點(diǎn)數(shù)目可在以下兩種方法中任選一種：

① NL= √A

式中：NL — 最少采樣點(diǎn)；

√A — 潔凈室或潔凈區(qū)的面積，單位為平方米（m2）。

②查表

沉降菌的采樣點(diǎn)位置同懸浮粒子的布點(diǎn)。

測試步驟：

① 測試前培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。

② 將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點(diǎn)布置圖逐個(gè)放置，然后從里到外逐個(gè)打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。

③ 靜態(tài)測試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為30min以上；動(dòng)態(tài)測試時(shí)， 培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為不大于4h。

④ 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿放置于(30～35)℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至少48小時(shí)。

⑤ 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。

可每批選定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。

菌落計(jì)數(shù)：

① 用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5～10倍放大鏡檢查是否遺漏。

② 若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。

注意：

① 采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。

② 由于細(xì)菌種類繁多差別較大，計(jì)數(shù)時(shí)一般在背面透射光下觀察。注意不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別， 必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

最少培養(yǎng)皿數(shù)：

在滿足最少采樣點(diǎn)數(shù)目的同時(shí)，還應(yīng)滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見下表：

采樣時(shí)注意事項(xiàng)：

① 布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口。

② 采樣時(shí)，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少走動(dòng)。

③ 應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染。

④ 培養(yǎng)皿在用于檢驗(yàn)時(shí)，為避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過程造成的影響，宜同時(shí)進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取一個(gè)對(duì)照 皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng) 皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。

⑤ 對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。

計(jì)算結(jié)果：

7.浮游菌

浮游菌的測試條件、狀態(tài)、最少采樣點(diǎn)數(shù)目、采樣點(diǎn)布點(diǎn)、菌落計(jì)數(shù)與沉降菌相同。

測試步驟：

1. 測試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。

2. 采樣器進(jìn)入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用 于100級(jí)潔凈室的采樣機(jī)宜預(yù)先放在被測房間內(nèi)。

3. 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。

4. 采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子 的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn) 盤。

5. 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對(duì) 采樣管的外壁及內(nèi)壁進(jìn)行消毒時(shí)，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并 晾干。#p#分頁標(biāo)題#e#

6.采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上 放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒或戴無菌手套操作。

7. 采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器， 使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并檢查流量 并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時(shí)間。

8.關(guān)閉浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。

9. 置采樣口于采樣點(diǎn)后，開啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。

10.全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于30℃～35℃培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)不少于48小時(shí)。

11. 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。 可每批選定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。

最小采樣量：

注意事項(xiàng)：

① 對(duì)于單向流潔凈室（區(qū)）或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流潔凈室（區(qū)），采樣口向上。

② 布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口。

③ 采樣時(shí)，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少走動(dòng)。

④ 應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染。

⑤ 培養(yǎng)皿在用于檢驗(yàn)時(shí)，為避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過程造成的影響，宜同時(shí)進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取一個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不 需暴露采用，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。

結(jié)果判定：

① 每個(gè)測點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于所選定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。

② 在靜態(tài)測試時(shí)，若某測點(diǎn)的浮游菌平均濃度超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合 格才能判為符合。

8.照度

主要工作室一般照明的照度值為300lx。

輔助工作室的照度宜不低于150lx。

對(duì)照度有特殊需求的生產(chǎn)部位可設(shè)置局部照明。

9.噪聲

潔凈室內(nèi)額空態(tài)噪聲級(jí)，非單向流潔凈室不應(yīng)大于60dB，單向流、混合流潔凈室不應(yīng)大于65dB。